相关仪器液相色谱仪的检测过程
在仪器中
固体密度计相关的液相色谱仪检测分析过程中，硅胶色谱柱上被吸附的样品成分累积到一定程度时，就开始形成新的固定相。新的检测物质能与残留杂质作用形成一定的分离机理，从而导致保留时间波动，出现拖尾现象。随着时间的积累，色谱柱的反压就会超过泵所能承受的最大压力，使色谱柱无法工作以及在堵塞处产生空体积。
再生被污染的液相色谱柱的关键是了解污染物的性质并且找到适当的溶剂来清除。如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的，可用90～100%较强的溶剂冲洗20个体积可以清除污染物。例如，柱子中残留的脂质就能用非水溶剂如甲醇、乙晴、四氢呋喃。如果使用的是缓冲液系统，不要直接切换到强溶剂，突然转换到高浓度有机溶剂可能会使HPLC流动体系中的缓冲液沉淀，这样会导致更大的问题如柱头堵塞、管道堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。应该先用无缓冲流动相（即把缓冲液换成水）冲洗5～10个体积以后才更换强溶剂。
有时候，强溶剂也没法把残留在色谱柱上的污染物洗掉。那么就需要使用更强的溶剂或者多重溶剂来清洗柱子。一般来说，所有的清洗方法都有类似的形式。所用的溶剂都是随溶剂强度增加，经常最后一个溶剂是非常疏水的（如醋酸乙酯），可以用来溶解非极性物质如脂质和油类。在使用多重溶剂时，须保证每个溶剂都能与下一个溶剂互混。清洗过程要结束时，必须借助一个中等强度能互混的溶剂而回到原始溶剂系统。例如，异丙醇是一个非常好的作为中间步骤的溶剂，因为它能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶。但是异丙醇粘度非常大，必须确保较低的流速以免使泵压过高。当然，如果使用紫外检测器的话，避免溶剂在紫外区域有吸收，要不然需使用大量的溶剂冲洗才能使基线平稳。
硅胶键合柱常用的缓冲溶液可使用以下溶剂：100%甲醇、100%乙腈、75%乙腈－25%异丙醇、100%异丙醇、100%二氯甲烷、100%正己烷。用二氯甲烷或正己烷以后，由于溶剂相容性柱子必须用异丙醇冲洗后才能用原来的水相溶剂，每种溶剂至少冲洗10个柱体积。如250mm×4.6mmHPLC分析柱，可以用1～2ml/min的流速来冲洗，要回复原来的溶剂体系，不需要每一步都冲洗，可以跳过中间步骤。中间步骤可使用异丙醇，然后用没有缓冲的流动相，最后回复起始流动相配置。四氢呋喃是另外一种教常用的去除污染的溶剂。如果色谱柱被严重污染，可以二甲基亚砜或者二甲基甲酰铵和水按50：50的比例混合用低于0.5ml/min的流速流过色谱柱。成功再生反相柱子是一个非常耗时间的过程，溶剂冲洗可以利用梯度洗脱系统操作；还有一个问题是清洗过程中是否可以反冲HPLC色谱柱，因为大多数强保留的污染物都会累积在柱头，把柱子反过来可以缩短污染物被冲出柱子的移动距离。考虑到装填柱子的稳定性，现在大多数HPLC柱子都是比普通操作压力大很多的高压装填的，因此他们的柱床应该不会受到反方向流速的影响。但是，如果头上的烧结比尾部的烧结孔径大的话。例如尾部烧结的孔径是2μm，通常能够留住平均5μm孔径里的填料。如果这种孔径大于装填颗粒尺寸分布曲线的最小粒径时，有些填料能穿过这些缝隙而流出色谱柱，这样会导致空白出现。
清洗色谱柱的频率主要看有多少强保留物质流经色谱柱，因为反相柱有时候在分辨率消失或者鬼峰出现前能承受很大的污染，使用者经常会等到出现了异常情况才开始注意。然而，污染物过多的累积会导致清洗柱子的难度加大。所以，经常用杂质较多的样品上样时，应当有规律地清洗柱子。
